抗原修複鍋采用的修複方法一共有兩種
更新時間:2020-02-25 點擊次數:2185次
抗原修複鍋怎樣工作?
看上去,抗原修複鍋似我們烹飪的高壓鍋。這是一款功能*的“高壓鍋”,主要用於抗原暴露的工作,主要的工作原理也是裝玻片的幾個分室可以達到高溫(>120°C)高壓。靈敏的傳感控製器來保持一定的溫度和壓力及一定的時間,這些工作參數都是經過嚴格的科學實驗得到的數據。當達到需要的溫度,抗原修複鍋會在該溫度下保持幾分鍾,之後鍋內玻片被冷卻2個多小時,特殊設材質的內鍋體控製了鍋和玻片的冷卻速度。
免疫組織化學方法成功與否關鍵在於抗原決定簇的保存和暴露。組織經甲醛固定,甲醛的醛基與抗原蛋白的氨基交聯,使決定簇的構像改變,從而影響檢測蛋白表達。要充分暴露抗原決定簇,通常用到抗原修複鍋。強烈推薦EMS*有競爭力的一款產品,適於甲醛固定的組織經石蠟包埋後進行免疫染色前的處理,配合特別的抗原修複緩衝液確保你得到z高質量的免疫染色效果。
(1)抗原修複鍋的加熱修複法:加熱修複法分為高壓加熱修複法和微波修複法兩種:
①高壓加熱修複法:取一定量枸櫞酸鹽緩衝液(pH=6.0)於高壓鍋中,大火加熱直至沸騰。將脫蠟水化後的組織切片置於不鏽鋼或耐高溫塑料切片架上,放人己沸騰的緩衝液中。蓋上鍋蓋,扣緊壓力閥,繼續加熱至噴汽。
從噴汽開始計時.1~2分鍾後,高壓鍋離開熱源,冷卻至室溫(稍冷後,可在自來水籠頭下加速冷卻),取出玻片,先用蒸餾水衝洗2次,再用PBS衝洗2次,每次3分鍾。注意加熱時間長短的控製很重要,從組織切片放人緩衝液到高壓鍋離開火源的總時間控製在5―8分鍾為好.
時間過長可能會使染色背景加深。緩衝液的量必須保證能浸泡到切片,用過的枸櫞酸緩衝液不能反複使用。
②抗原修複鍋的微波修複法:取一定量pH6.0枸櫞酸鹽緩衝液(緩衝液量不得小於500m1),於微波盒中,微波加熱直至沸騰,將脫蠟水化後的組織切片置於耐高溫塑料切片架上。放人己沸騰的緩衝液中,中高檔微波繼續處理15―20分鍾,取出微波盒冷卻至室溫,從緩衝液中取出玻片。先用蒸餾水衝洗2次,之後用PBS衝洗2次,每次3分鍾。
(2)胰蛋白酶消化修複法:主要用於細胞內抗原的顯示。使用0.1%氯化鈣液(pH7.8)製成0.1%胰蛋白酶液,37℃孵育切片15~30分鍾,之後用PBS洗滌3次,每次3分鍾。
(3)胃蛋白酶消化修複方法:主要用於細胞間質抗原的顯示。一般使用濃度為0.4%,消化時間為37℃,30~180分鍾。
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